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高效逆流色谱仪HPCCC常见问题解答及选购指南(五)
2013-5-2 14:29:13

 

高效逆流色谱HPCCC常见概念(二)

 

1. 分离度(分辨率)                            

 

这种技术具有高分离性能的关键是它具有高固定相保留因子. 这对分离纯化的性能有什么影响呢?正如左边的谱图所示,好的固定相保留因子能获得好的分离度。我们可以看到固定相保留因子越高,实现的分离度越好。以前的高速逆流色谱仪HSCCC固定相保留因子最多也不过70%;而现在的高效逆流色谱仪HPCCC固定相保留因子一般都要高于 85%

 

这主要带来两个好处。第一个好处是具有高固定相保留因子,扩大了两相溶剂体系的范围。这很容易理解,从非极性两相溶剂体系到极性两相溶剂体系固定相保留因子降低(即极性变强). 因此,在过去由于固定相保留因子太低,不能利用这个技术解决纯化分离遇到的问题

 

由于工业上在非极性范围一直采用反相高效液相色谱技术,这种技术并没有被采用。第二个好处关系到纯化分离的通量和速度。过去,尽管这项技术叫高速逆流色谱,但是名不符实。因为分离纯化时间经常是以小时计算而不是分钟。高的固定相保留因子允许在不损失分离度的状况下提高流动相流速。右边图示例子。现在的HPCCC,溶剂的极性范围扩大,使高通量的分离纯化能够实现。

 

 

2. 柱长的影响                                    

 

可以通过增加柱长来提高分离度,这一点与常规采用固体固定相色谱技术的不同。因为HPCCC 是一种低压分离技术,柱长不受限制。分离度与柱长倍数的平方根成正比(如,柱长为2倍时,相当于提高分离度为2的平方根,即1.4)。显然,柱长增加,分离时间也增加了,但是通量(产量)却不受影响,因为样品负载能力是柱体积的a %(在上面的例子,样品的负载加倍,但是分离时间也是加倍,因此生产能力保持不变)。所以产品研发阶段,可以先在小级别的设备上检验工艺条件是否合适。用户可以根据最重要的工艺参数(通量,产率和纯度),放大工艺条件,制作柱子。

 

 

 

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